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          復活草安心寧口罩:醫用外科口罩與一次性口罩防護能力比較研究

          作者: 時間:2020-06-24

          安心寧醫用外科口罩

          安心寧醫用外科口罩10年來,隨著傳染病的發病率持續升高,特別是呼吸系統傳染病的多發,醫務人員逐漸成為院內呼吸道傳染病的高危人群。因呼吸系統傳染病的傳染源是病人或病原體攜帶者,通過飛沫經由呼吸道傳播,傳染性強,傳播速度快,所以醫務人員需要進行有效的自我防護。

          在這種情況下,口罩成為了醫務人員最常用的防護工具。目前醫務人員常用的口罩有醫用外科口罩和一次性口罩兩種,而如何選擇口罩,醫務人員存在著一定的分歧?;诖?,本研究期望通過實驗能夠證實兩種口罩在防護能力上存在的區別,期望為醫務人員提供確切的選擇依據?,F報告如下。

          安心寧醫用外科口罩

          一、方法

          1、細胞培養

          人肺支氣管上皮細胞(BEAS?2B)選擇DMEM高糖培養基(10%胎牛血清,1%青鏈霉素),在孵育箱中,溫度37℃,5%CO2的條件下培養。傳代時先吸取上清,用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗兩遍,37℃,0.25%胰酶消化3min,正常培養基終止消化,以1000r/min離心5min后收集細胞,去掉上清,加入正常培養基,按照1∶3傳代。凍存液配方按照培養基:血清∶二甲基亞楓(DMSO=5∶4∶1配制。

          2、條件培養基制備與分組

          收集香煙煙霧的裝置經過乙醇擦拭后,在生物安全柜中與香煙一起用紫外燈照射30min滅菌,煙霧收集后經過不同的口罩濾過后吹入BEAS?2B培養基中,并標注。根據培養基不同分為對照組(正常培養基)、一次性口罩組和醫用外科口罩組。

          安心寧醫用外科口罩

          3、噻唑藍(MTT)實驗

          按照1500/孔,BEAS?2B細胞接種在96孔板中,加入正常培養基和條件培養基,每組6個復孔,生長72h后,加入MTT,孵育箱培養4h,取出去掉上清液,每孔加入150μLDMSO,震蕩5min,酶標儀讀取570nm波長的吸光度。

          4、克隆形成實驗

          按照1500/BEAS?2B細胞接種在6孔板中,分別加入正常培養基和條件培養基,每組3個復孔,正常培養;2周后,取出培養板,去掉上清液,磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗2遍,加入甲醇固定30min,去掉甲醇,PBS清洗2遍,加入考馬斯亮藍染色2h,清水沖洗后晾干。

          安心寧醫用外科口罩

          5、蛋白質提取

          100mm細胞培養培養的BEAS?2B,在80%密度時,將培養皿置于冰上,吸掉上清液,PBS清洗2遍,加入500μL強放射免疫沉淀分析(RIPA)裂解液靜置5min,細胞刮刀刮下轉移至1.5mLEP管中,14000r/min,4℃離心15min,上清液轉移到新的1.5mLEP管中,加入聚丙烯酰胺凝膠電泳(5xSDS?PAGE)緩沖液稀釋至1x,98℃加熱5min,分裝,-20℃保存。

          6、蛋白質印記法(Westernblot

          配制12%分離膠,6%濃縮膠,20μL樣品,電壓80V濃縮膠,120V分離膠,100V恒壓轉膜40min,5%胎牛血清封閉1h,抗體Actin1∶2000),活性半胱氨酸蛋白酶3cleavedcas?pase3,1∶1000),活性半胱氨酸蛋白酶8(cleavedcas?pase8,1∶1000),增殖細胞核抗原(Ki?67,1∶10004℃孵育過夜。第2天,二抗孵育后化學發光液(ECL)顯影。

          安心寧醫用外科口罩

          7、統計學方法

          數據采用均數±標準差(x±s)表示,不同組間比較采用t檢驗。以P<0.05為差異具有統計學意義。

          二、結果

          1、組細胞增殖能力比較

          與對照組相比,醫用外科口罩條件培養基組BEAS?2B細胞增殖受到抑制(P<0.05),但是一次性口罩條件培養基組BEAS?2B細胞增殖與對照組相比,受到的抑制更為明顯(P<0.01),且與醫用口罩條件培養基組比較差異有統計學意義(P<0.05)。Westernblot檢測Ki?67結果進一步證實了這一結果。見圖1、圖2。



          2、組細胞活性比較

          與對照組相比,醫用外科口罩條件培養基組BEAS?2B細胞活性受到抑制(P<0.05),但是一次性口罩條件培養基組BEAS?2B細胞增殖與對照組相比受到抑制更為明顯(P<0.01),而且與醫用口罩條件培養基組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見圖3。


          3、組細胞凋亡情況比較

          與對照組相比,醫用外科口罩條件培養基組BEAS?2B細胞凋亡標志蛋白活性cleavedcaspase38表達升高(P<0.05),但是一次性口罩條件培養基組這兩個蛋白升高更為明顯(P<0.01),而且與醫用外科口罩條件培養基組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見圖4。


          安心寧醫用外科口罩呼吸系統相關的衛生事件多發,常見的流行性感冒、風疹、流行性腮腺炎、水痘,以及更為危險的重癥急性呼吸綜合征(SARS)、新型冠狀病毒肺炎等,這些傳染病主要通過呼吸道傳播,因此呼吸道的防護成為對抗這些疾病的基本且有效的措施。

          本研究結果顯示,兩種口罩濾過后的香煙煙霧融入到培養基中,都能夠抑制正常肺上皮細胞的增殖和活性,并且誘導細胞凋亡。但是醫用外科口罩對細胞的影響較小,也就是說,雖然兩種口罩都不能做到完全有效防護,但是醫用外科口罩的防護能力明顯高于一次性口罩。

          安心寧醫用外科口罩

          在正常工作中,醫護人員感染呼吸道病毒的病例不在少數。盡管醫護人員要求在進行高感染風險醫療活動或準備進入隔離病房時需配戴口罩,平時工作中是否需要佩戴口罩并沒有明確的要求。但是沒有癥狀的病毒攜帶者也是重要的傳染源,因此醫護人員在工作過程中全程佩戴口罩是很有必要的,而且要盡量選擇醫用外科口罩,以保證有更好的防護效果。

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